薬効薬理49 （2）リンパ球増殖抑制作用（ in vitro） （3）T細胞機能に対する影響（ in vitro 及びカニクイザル）44）社内資料：In vitroヒトリンパ球増殖アッセイ41）社内資料：T細胞機能に対する影響【 方法 】ヒトリンパ球を用いたリンパ球増殖アッセイ（n=3~9）を用い、ボクロスポリン及びその5つの代謝物［IM9、IM4、IM4n 、IM1c（R）、IM1-Diol-1］の免疫抑制力価を検討した（最終濃度：0～1,000ng/mL）。細胞培養系において、抗体を介してT細胞受容体を刺激してヒトリンパ球を3日間活性化することで、カルシニューリン依存性のリンパ球増殖を誘導した。IC50＝Half maximal inhibitory concentrationa ：［3H］-TdR 取り込み試験b ：S/G2M 細胞上のPCNA発現c ：CD3+細胞における産生/発現【 方法 】カニクイザル全血を用いたin vitro試験（n=5）において、リンパ球増殖、T細胞のサイトカイン産生及び T細胞活性化表面抗原の発現に関するmix-ISA247 及びシクロスポリンAのEC50を検討した。mix-ISA247及びシクロスポリンAの投与量は、50-10,000ng/mLであった。カニクイザル（雌雄の特定なし）を用いた in vivo 試験において、溶媒（n=4）、シクロスポリンA 25mg/kg（n=5）、mix-ISA247 25mg/kg（n=6）又は mix-ISA247 50mg/kg（n=6）を1日2回、7日間経口投与した。EC50＝Half maximal effective concentrationヒトリンパ球を用いたリンパ球増殖アッセイにおいて、ボクロスポリンの力価IC50（平均値±SD）は17.5±9.6ng/mLであった。5つの代謝物の力価はIC50に基づいたとき、ボクロスポリンの1%未満（IM1-Diol-1）から12.9%（IM9）であった。サル全血を用いた in vitro試験における、リンパ球増殖、T細胞のサイトカイン産生及び T細胞活性化表面抗原の発現に関するEC50は下記の通りであった。カニクイザルを用いたin vivo試験において、PCNA（増殖細胞核抗原）を指標にしたリンパ球増殖の阻害率はmix-ISA247で80% 、シクロスポリンAで65%であった。 mix-ISA247203±59241±73135±30177±59139±27170±57138±38 267±106191±99248±85EC50（ng/mL）シクロスポリンA 766±258495±49 537±107 681±199 542±118 569±228 432±133584±86422±68 638±2023HTdRaPCNAbIL-2 cIFN-γcTNF-α cCD71cCD25 cCD11a cCD95 cCD154 c
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